液相色譜儀的操作過(guò)程

液相色譜法開(kāi)始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動(dòng)相，稱為經(jīng)典液相色譜法，此方法柱效低、時(shí)間長(zhǎng)（常有幾個(gè)小時(shí)）。液相色譜法(HighperformanceLiquidChromatography，HPLC)是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來(lái)的。它與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會(huì)引起高阻力，需用高壓輸送流動(dòng)相，故又稱高壓液相色譜法(HighPressureLiquidChromatography，HPLC)。又因分析速度快而稱為高速液相色譜法(HighSpeedLiquidChromatography，HSLP)。也稱現(xiàn)代液相色譜。

液相色譜儀的操作過(guò)程如下：

  　1.  翻開(kāi)HPLC工作站（包含計(jì)算機(jī)軟件和色譜儀），銜接好活動(dòng)相管道，銜接檢測(cè)體系。

　  2. 對(duì)抽濾后的活動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。

　　3.過(guò)濾活動(dòng)相，根據(jù)需求挑選不一樣的濾膜。

　　4進(jìn)入HPLC操控界面主菜單，點(diǎn)擊manual，進(jìn)入手動(dòng)菜單。

　　5. 有一段時(shí)刻沒(méi)用，或許換了新的活動(dòng)相，需求先沖刷泵和進(jìn)樣閥。沖刷泵，直接在泵的出水    口，用針頭抽取。沖刷進(jìn)樣閥，需求在manual菜單下，先點(diǎn)擊purge，再點(diǎn)擊start，沖刷時(shí)速度不要超越10ml/min。

　　6. 調(diào)理流量，初度運(yùn)用新的活動(dòng)相，能夠先試一下壓力，流速越大，壓力越大，通常不要超越2000。點(diǎn)擊injure，選用適宜的流速，點(diǎn)擊on，走基線，調(diào)查基線的狀況。

　　7. 規(guī)劃走樣辦法。點(diǎn)擊file，選擇select?users?and?methods，能夠選擇現(xiàn)有的各種走樣辦法。若需樹(shù)立一個(gè)新的辦法，點(diǎn)擊new?method。選擇需求的配件，包含進(jìn)樣閥，泵，檢測(cè)器等，根據(jù)需求而不一樣。選完后，點(diǎn)擊protocol。一個(gè)完整的走樣辦法需求包含：a.進(jìn)樣前的穩(wěn)流，通常2-5分鐘；b.基線歸零；c.進(jìn)樣閥的loading-inject變換；d.走樣時(shí)刻，隨不一樣的樣品而不一樣。

　　8. 進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。選定走樣辦法，點(diǎn)擊start。進(jìn)樣，一切的樣品均需過(guò)濾。辦法走完后，點(diǎn)擊postrun，可記載數(shù)據(jù)和做符號(hào)等。悉數(shù)樣品走完后，再用上面的辦法走一段基線，洗掉剩余物。

　　9 關(guān)機(jī)時(shí)，先關(guān)計(jì)算機(jī)，再關(guān)液相色譜。

液相色譜儀的分離方法：

色譜法的分離原理是：

溶于流動(dòng)相(phase)中的各組分經(jīng)過(guò)固定相時(shí)，由于與固定相(stationaryphase)發(fā)生作用（吸附、分配、離子吸引、排阻、親和）的大小、強(qiáng)弱不同，在固定相中滯留時(shí)間不同，從而先后從定相中流出。又稱為色層法、層析法。

色譜法zui早是由俄國(guó)植物學(xué)家茨維特（Tswett）在1906年研究用碳酸鈣分離植物色素時(shí)發(fā)現(xiàn)的，色譜法(Chromatography)因之得名。后來(lái)在此基礎(chǔ)上發(fā)展出紙色譜法、薄層色譜法、氣相色譜法、液相色譜法。